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GV3101(pJIC SA_Rep)電擊感受態細胞 ,根癌農桿菌電擊感受態

別名:
Cas號: 物化性質:
分子式: 熔點:
分子量: 沸點:
EINECS編號: 密度:
MDL號: 儲存條件:

GV3101 (pJIC SA_Rep) Elec:                                      50μl/支
pGs2(control vector,10ng/μl )                                     10μl
保存條件(保質期):                                          -80℃(12個月) 
基因型
C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gentR) Nopaline(pJIC SA_Rep -tetR)
產品說明
GV3101(pJIC SA_Rep)菌株為C58型背景,核基因中含有篩選標簽——利福平抗性基因rif,為了便于轉化操作,此菌株攜帶一無自身轉運功能的胭脂堿型Ti質粒pMP90 (pTiC58DT-DNA),此質粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件,pMP90 (pTiC58DT-DNA)質粒自身的T-DNA轉移功能被破壞,但可以幫助轉入的雙元載體T-DNA順利轉移)。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型Ti 質粒含有篩選標簽:gent,賦予GV3101菌株慶大霉素抗性;在GV3101菌株中轉入help質粒:pJIC SA_Rep即為GV3101(pJIC SA_Rep)菌株,可幫助pgR106,pgR107,pGreen,pGs2系列質粒在農桿菌中復制,同時賦予該菌株四環素(tet)抗性,適用于擬南芥、煙草、玉米、土豆等植物的轉基因操作。本公司的GV3101(pJIC SA_Rep)電轉感受態特別適用于大質粒的轉化:經pGs2(卡那霉素抗性)質粒檢測轉化效率>10cfu/μg。
 
操作方法
1. 0.1 cm電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘,待其瀝干水分,正置5分鐘,使乙醇充分揮發,待乙醇揮發干凈立即插入冰中,壓實冰面,電極杯頂離冰面0.5 cm以方便蓋上杯蓋,冰中靜置5分鐘充分降溫。
2. 取-80℃保存的農桿菌感受態插入冰中5分鐘,待其融化,加入0.01-1 μg質粒DNA(體積不大于6ul,感受態轉化效率較高,第一次使用前最好做預實驗確定所加質粒的量),用手撥打管底混勻,立即插入冰中,用200 μl槍頭將感受態-質粒混合物快速移到電擊杯中,蓋上杯蓋,空管保留待用。
3. 啟動電轉儀,設置參數:C=25 μF,PC=200 ohm,V=2400 V(此參數為Biorad 推薦,使用者也可按所用電轉儀推薦的protocol操作),將電擊杯快速放入電轉槽中,電擊完成快速插入冰中,加入700 μl無抗生素的LB并轉移到感受態空管中,28℃振蕩培養2~3小時。
4. 6000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培養箱培養2-3天

       平板只含有50 μg/ml kan 時,28℃培養48 h即可;平板中同時加入50 μg/ml kan20 μg/ml rif 時,需28℃培     60 h;如果使用的平板含有50 μg/ml rif 則需要28℃培養72-90 h)。
 
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GV3101(pJIC SA_Rep)電擊感受態細胞