該限制性內切酶識別5'-C↑TCGAG-3'的酶切位點,并在W緩沖液中具有最佳活性。
分子克隆等
高酶濃度和非最佳緩沖液的使用可能導致星活性, 使用BSA時不要長時間孵育。 為了獲得更高的活性,應將BSA加入到1X 反應混合物中至最終濃度為100 μg/ ml。
2 KU/管XhoI,10X Buffer W,10X Single buffer
識別位點 | 5'-C↑TCGAG-3' |
來源 | 攜帶來自黃單胞菌的xhoIR克隆基因的重組大腸桿菌 |
最適緩沖液 | 10X buffer W(100 mM Tris-HCl(pH 8.5),100 mM MgCl2,1000 mM KCl,1 mg/mL BSA) |
通用緩沖液 | 10X Single buffer |
孵育 | 37°C |
酶活定義 | 1U酶是在1 h,37°C,總反應體積為50 μl 時水解1 μg λDNA所需的酶 |
儲存 | -20°C |
儲存條件 | 10 mM Tris-HCl(pH 7.4,25°C),100 mM KCl,1 mM DTT,1 mM EDTA,0.2 mg/mL BSA,0.15% Triton X-100,50%甘油 |
連接與重切 | 使用 10 倍酶量消化底物,回收酶切產物。在 22°C 下使用適量 T4 DNA 連接酶可以將超過 95%的酶切產物重新連接。將連接產物再次回收后,使用相同的內切酶可以重新切開超過 95%的連接產物 |
甲基化影響 | dam甲基化不敏感,dcm甲基化不敏感,CpG甲基化敏感 |
熱失活 | 在80°C加熱20分鐘失去活性 |