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瓊脂糖凝膠電泳試劑盒
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本試劑盒適用于瓊脂糖凝膠DNA的純化回收。在高離序鹽存在的情況下,DNA片斷選擇性的吸附于離心柱內的硅基質膜上,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,漂洗液將引物、核苷酸、蛋白、酶等雜質去除,最后低鹽、高pH值的洗脫緩沖液將純凈DNA從硅基質膜上洗脫。
離心吸附柱內硅基質膜全部采用進口世界著名公司特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復性好。克服了國產試劑盒膜質量不穩定的弊端。
使用了優質溶膠液,不含傳統溶膠液的碘化鈉和高氯酸鹽,不抑制回收后酶切、連接克隆等下游反應。
溶膠液調制成為了黃顏色,便于觀察溶膠效果和監測pH值變化從而達到最佳結合效果,大大提高回收效率。
改進的溶膠液配方,大大提高了緩沖能力和穩定性,即使樣品變化很大也能將pH緩沖在最佳結合范圍內。
快速、方便,不需要使用有毒的苯酚、氯仿等試劑,也不需要乙醇沉淀。
在長波紫外燈下,用干凈刀片將所需回收的DNA條帶切下,盡量切除不含DNA的凝膠,得到凝膠體積越小越好。
將切下的含有DNA條帶凝膠放入1.5mL離心管,稱重。
先稱一個空1.5mL離心管重量,然后放入凝膠塊后再稱一次,兩次重量相減,得到凝膠的重量。
加3倍體積溶膠液DD。
如果凝膠重為100mg,其體積可視為100μL,則加入300μL溶膠液。
如果凝膠濃度大于2%,應加入6倍體積溶膠液。
56℃水浴放置10分鐘(或直至膠完全溶解)。每2~3分鐘渦旋震蕩一次幫助加速溶解。
可選,一般不需要:每100mg最初的凝膠重量加入150μL的異丙醇,震蕩混勻。
有時候加入異丙醇可以提高回收率,加入后不要離心。回收大于4Kb的片段時,不加入異丙醇,加入有時反而可能降低回收效率。
將上一步所得溶液加入吸附柱EC中(吸附柱放入收集管中),室溫放置1分鐘,12000rpm離心30~60秒,倒掉收集管中的廢液。
使用平衡液預處理硅膠膜吸附柱為必做步驟,具體方法參見附錄參考“關于平衡液的使用”。
如果總體積超過750μL,可分兩次將溶液加入同一個吸附柱EC中。
過濾下的溶膠液和收集管內殘存的強堿性平衡液混合后,溶膠液可能會從黃色變成橘紅甚至紫色,此為酚紅pH指示劑堿性條件下的正常顏色變化。
加入600μL漂洗液WB (
請先檢查是否已加入無水乙醇!
),12000rpm離心30秒,棄掉廢液。
加入600μL漂洗液WB,12000rpm離心30秒,棄掉廢液。
將吸附柱EC放回空收集管中,12000rpm離心2分鐘,盡量除去漂洗液,以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應。
取出吸附柱EC,放入一個干凈的離心管中,
在吸附膜的中間部位
加50μL洗脫緩沖液EB(洗脫緩沖液事先在65~70℃水浴中加熱效果更好),室溫放置2分鐘,12000rpm離心1分鐘。如果需要較多量DNA,可將得到的溶液重新加入吸附柱中,離心1分鐘。
洗脫體積越大,洗脫效率越高,如果需要DNA濃度較高,可以適當減少洗脫體積,但是最小體積不應少于25μL,體積過小降低DNA洗脫效率,減少產量。
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